结构光照明荧光显微镜是一类宽场超分辨荧光显微设备,依托调制的条纹结构光照明样品,借助莫尔混频效应将样品超出衍射极限的高频结构信息编码进探测器可接收频段,再通过算法重建得到超分辨图像。它突破传统光学显微镜的阿贝衍射极限,兼顾成像速度、低光损伤与常规荧光探针兼容性,是活细胞动态纳米结构观测的核心工具之一。
成像基本原理
传统宽场荧光显微镜受衍射效应约束,光学传递函数(OTF)存在固定截止频率,样品上空间频率过高的精细结构信息无法被系统采集,横向分辨率理论上限约 200 nm 左右。SIM 的核心思路就是频域混频、信息搬移、解码重建。
系统利用光栅、空间光调制器或数字微镜器件生成周期性条纹结构光照射样品;当该已知高频照明条纹与样品自身精细结构叠加时,会产生莫尔条纹。原本超出系统截止频率、无法直接探测的样品高频信息,被混频后变成低频莫尔信号,进入显微系统的可探测通带并被相机记录。
实际成像过程中,需要采集多组原始图像:改变结构光的相位与旋转方向(一般 3 个方向、每个方向 3 个相位,共 9 帧原始图用于二维 SIM,三维 SIM 采集更多序列),将不同编码下的混频信息全部收集。之后依托傅里叶变换算法,把搬移到低频区的高频信息还原回原始频域位置,补齐频谱,重构出分辨率提升的超分辨图像。线性 SIM 理论上可将横向分辨率提升约 2 倍,轴向三维 SIM 同时改善 Z 轴层切能力,实现三维超分辨成像。
另外还有一类简易结构光光切片模式(非超分辨 SIM),同样使用条纹照明,通过多帧相减去除焦外杂散荧光,只保留焦面信号,用于快速光学切片、降低背景,适合厚样品三维扫描,但不追求超分辨效果,需要和超分辨 SIM 区分开。
核心功能
1.超分辨二维与三维荧光成像 可突破衍射极限,分辨常规荧光显微镜无法看清的亚细胞精细结构,如细胞骨架微丝、膜囊泡、突触结构、核孔复合物等;三维 SIM 逐层采集并重构,输出细胞、组织薄片的三维超分辨数据集,实现纳米尺度三维可视化。
2.活细胞动态时序成像 宽场并行采集机制成像速度远高于单点扫描的共聚焦显微镜,能够捕捉细胞内囊泡转运、骨架重塑、蛋白聚集、钙信号波动等动态生命过程,支持长时间时序拍摄,追踪动态事件演化。
3.多色荧光同步成像 兼容多通道荧光激发,可同时标记两种及以上生物分子,实现多靶点共定位观测,分析不同蛋白之间的空间相互关系。
4.厚样品光学切片与降噪成像 基础结构光切片功能可抑制离焦荧光背景,提高图像对比度,减少厚样品的背景噪光干扰,适用于组织切片、类器官等较厚生物样品成像。
5.定量图像分析输出 重建图像可用于结构尺寸测量、荧光强度定量、共定位系数计算、运动轨迹追踪等后续定量分析;结合深度学习重建算法,还可进一步缩短重建耗时、提升低信噪比样品成像质量。